谷胱甘肽化是还原型谷胱甘肽(GSH)与蛋白质半胱氨酸巯基形成的混合二硫键,是氧化应激下的重要巯基保护机制与信号传递方式。在 ROS 攻击下可阻止不可逆的亚磺酸 / 过硫化损伤。
谷胱甘肽化由巯基在氧化应激下自发形成,或由谷胱甘肽 S-转移酶(GST)催化。GRX(谷氧还蛋白)系统是主要的去谷胱甘肽化酶,使用 NADPH / GR / GSH 还原系统维持巯基稳态。
利用 GRX 系统的可逆性,先去除游离 GSH,再在 GSSG 存在下用 GRX 处理将 SSG 还原为巯基,最后用 iodoTMT 或 IAM-alkyne 标记新巯基做富集。
使用 anti-GSH 抗体直接免疫沉淀 GSSG 蛋白。商业化抗体(ViroGen、Abcam)可识别 GSH 部分。注意:与其他混合二硫键(如 S-半胱氨酰化)有交叉。
先用 NEM 封闭游离巯基,再用 DTT 还原 SSG 生成新巯基,用 iodoacetyl-PEG2-Biotin 标记富集。简单有效但选择性较低。
谷胱甘肽化处于巯基氧化还原修饰网络的核心位置:
糖尿病、心血管病、神经退行中的 SSG 谱变化。
镰状细胞病、地中海贫血的血红蛋白 SSG 定量。
缺血再灌注下线粒体蛋白 SSG 动态。
对乙酰氨基酚、布洛芬等药物引起的肝 SSG 谱。
GRX 逆反应法 + iodoTMT 定量是推荐标准流程。
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