甲基化是组蛋白表观遗传调控的核心标记(H3K4、H3K9、H3K27、H3K36、H3K79 与 H4R3),也广泛发生在非组蛋白上调控 RNA 加工、信号转导与 DNA 损伤应答。
赖氨酸可被单甲基化(Kme1)、二甲基化(Kme2)、三甲基化(Kme3),由 KMT(如 SET 家族、MLL 家族、EZH2)添加、由 KDM(如 LSD1、JARID1)去除。精氨酸可被单甲基化(Rme1)或对称 / 不对称二甲基化(SDMA / ADMA),由 PRMT 家族催化。
针对特定位点使用高特异性抗体(如 H3K4me3、H3K27me3)。Aimsmass 实验室使用经过 ChIP-seq 验证的抗体,结合胶内分离,实现组蛋白修饰的精确定量。
抗 Kme1 / Kme2 / Kme3 抗体用于富集全细胞 K-甲基化蛋白。注意:Kme2 与 Kme3 抗体对底物状态有偏好,需在搜索中设置可变修饰。
酸抽提(0.1M HCl)或盐抽提(高盐)富集组蛋白,SDS-PAGE 分离 H1 / H2A / H2B / H3 / H4 后分别胶内酶解,LC-MS/MS 鉴定全位点修饰组合(如 H3K4me3K27ac 双修饰)。
MaxQuant / Proteome Discoverer 等搜索工具中需设置以下可变修饰(轻标):
Tazemetostat 等 EZH2 抑制剂处理后的 H3K27me3 全局变化。
PRMT5 抑制剂在肿瘤中调节的 R-甲基化底物谱。
胚胎干细胞分化过程中的组蛋白甲基化重塑。
p53、STAT1、RNA 结合蛋白的甲基化状态调控。
组蛋白修饰组合分析、非组蛋白 K/R 甲基化均提供完整流程。
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