泛素化是调控蛋白降解、亚细胞定位、信号转导与 DNA 损伤修复的核心翻译后修饰。E3 泛素连接酶的底物谱鉴定与动态泛素化定量是当前研究热点。
泛素(Ubiquitin)通过其 C 端甘氨酸与底物赖氨酸的 ε-氨基形成异肽键。质谱分析中常使用 K-ε-GG 抗体富集泛素化残基(因为胰蛋白酶酶解会在 R74 切断泛素,留下带两个额外甘氨酸的 K-GG 标签残基)。
最经典的泛素化组学方法。使用 anti-K-ε-GG 抗体特异性识别泛素化残基。需配合 MG132 等蛋白酶体抑制剂预处理细胞(4-8 h),防止泛素化蛋白降解。
识别泛素 C 端 13 个残基序列(...LRLRGG),对多聚泛素化与单泛素化均有效。灵敏度比 K-ε-GG 抗体高 2-3 倍,适合低样本量研究。
串联泛素结合域,对多泛素化链亲和力高,可保护底物不被去泛素化酶水解。适合低丰度泛素化蛋白富集。
泛素可通过其 7 个赖氨酸(K6、K11、K27、K29、K33、K48、K63)或甲硫氨酸(M1)形成多聚链,不同链型介导截然不同的生物学功能:
Aimsmass 提供基于 K-ε-GG 抗体的链型分析与 K-ε-GG 位点联合分析,需使用链型特异性抗体(如 K63-TUBE、K48-TUBE)做正交验证。
WT vs KO / KD 细胞系对比,鉴定 E3 酶特异底物与位点。
降解信号(degron)鉴定、PROTAC 作用机制研究。
UV / IR 处理后 K63 / K27 链型动态变化。
TCR / BCR 信号中的 NF-κB 通路泛素化事件。
告知 E3 酶 / 蛋白酶体 / DNA 损伤等研究方向,技术团队将推荐抗体与定量策略。
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